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目的：

通過實驗研宄，闡明*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響及作用機 制。

方法：

第1部分：*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響

• *安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響

條件性恐懼模型的復制：將實驗動物隨機分為空白對照組、模型對照組、給 藥組，每組10只。給藥組實驗動物給予*安神丸混懸液（經灌胃途徑給予，

• 81mg/g)，空白對照組、模型對照組均給予相同體積的雙蒸水，1次/曰，連續 7日。在末次給藥后，將模型對照組、給藥組實驗動物依次放入條件性恐懼刺激 箱內，適應120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號(2000Hz，75dB)。 第125秒，在聲音信號的基礎上給予實驗動物持續5秒的不可逃避的足底電刺激 (0.75mA)。第130秒聲音信號與電刺激同時結束，130?190秒內不做任何處理。 第190秒重復120?190秒過程，連續20次?？瞻讓φ战M僅給予聲音信號不給予 電刺激，其他操作相同。結束后讓實驗動物在刺激箱內停留120秒后再放回飼養 籠。

恐懼記憶習得測試：復制條件性恐懼模型的次日，將各組實驗動物依次再放 入刺激箱內，適應120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號（2000Hz， 75dB)。第130秒聲音信號結束，130?190秒內不做任何處理，記錄聲音信號停 止后60秒內實驗動物的值直反應時間。第190秒重復12CM90秒過程，連續5 次。結束后讓實驗動物在刺激箱內停留120秒后再放回飼養籠。記錄各組實驗動 物的僵直反應時間，以此作為觀測指標探究*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記 憶習得的影響。

• *安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響

按上述“*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行

條件性恐懼模型的復制，在習得測試后的第1、3、5、7天，將各組實驗動物依 次再放入刺激箱內，重復恐懼記憶習得測試的操作，記錄各組實驗動物的僵直反 應時間，以此作為觀測指標探宂*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影 響。

• *安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響

按上述“*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行

條件性恐懼模型的復制，在各組實驗動物進行條件性恐懼模型復制的次日，將各 組實驗動物放入大小鼠開場活動實驗箱內，記錄各組實驗動物運動時間、運動距 離，以此探究*安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響。

實驗儀器

條件性恐懼實驗監測系統(上海欣軟信息科技有限公司，型號XR-XC404-2)， 條件性恐懼刺激箱包含隔音箱和刺激箱，隔音箱為670x650x700mm的斯金納箱, 可接入攝像頭、蜂鳴器、喇叭刺激器等模塊。實驗箱尺寸為300x300x400mm的 亞克力箱，前后壁透明，左右壁黑白相間，箱子底部為(p4mm不銹鋼棒，軸間距 為16mm的不銹鋼棒，可通0?5mA恒定電流；

條件性恐懼實驗分析系統（上海欣軟信息科技有限公司，型號：SuperFcs); 

實驗結果表明：模型對照組實驗動物PS幅值變化率顯著高于空白對照組， LTP出現異常的增強。這種突觸功能可塑性的改變可能與條件性恐懼刺激過程 中，海馬出現應激損傷有關。而給藥組實驗動物的PS幅值變化率顯著低于模型 對照組，與空白對照組更為接近。說明*安神丸能夠下調海馬異常增強的LTP 7]C平，從而恢復了海馬LTP/LTD的正常調節。

LTP和LTD的誘導都依賴于NMDA受體，而受體激活后產生的是LTP還 是LTD，與突觸后膜Ca?濃度升高的水平有關。Ca²⁺濃度迅速的大幅度增加將誘 導LTP而適當程度的増加會誘導LTD。正常情況下NMDA與Glu結合后將突觸 前膜的電信號轉化成突觸后膜的Ca²⁺信號，使突觸后膜的Ca²⁺濃度升高，大量 的Ca²M乍為第二信使，可進一步激活生化級聯反應，從而改變突觸可塑性，產生 LTP。LTP產生后，突觸后膜的一些信使分子作用于突觸前膜，增強Glu的釋 放，維持LTP。但是，慢性應激增加海馬內Glu含量，Glu與NMDA受體結合， 激活NMDA受體門控的Ca²⁺通道，引起Ca²⁺過度內流，增強了 LTP, LTD受 到抑制，結果導致新的記憶不能與已有記憶整合，這可能是恐懼記憶難以消退的 機制之一。

綜上所述，本實驗確定了*安神丸具有促進恐懼記憶消退的作用，其作用 機理可能是與其保護海馬神經元，增強海馬突觸結構與功能可塑性相關。對于朱 砂安神丸是否能夠加強LTD，促進新記憶寫入己有記憶框架，需要通過測定給 藥后實驗動物LTD的情況進行實驗研究來驗證此假說。對于*安神丸具體改 變海馬區哪些相關蛋白的表達也有待進一步研究證實。